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原核生物mRNA的转录后加工 直接可用性:原核生物的mRNA原始转录产物(除个别噬菌体外)通常不需要经过复杂的后加工过程,即可直接用于蛋白质翻译。这意味着它们的mRNA在转录完成后,基本就具备了指导蛋白质合成的功能。加工简便性:原核生物缺乏真核生物所拥有的复杂转录后加工机制,如剪接、加帽和加尾等。
磷酸移除:首先,RNA三磷酸酶会从前体mRNA的5端移去一个磷酸基团。这一步是加帽过程的起始步骤,为后续的反应做准备。鸟苷酸添加:接着,鸟苷酸转移酶会在移去磷酸后的5端加上一个鸟嘌呤核苷酸(GMP),形成一个5,5-三磷酸连接的中间产物。这一步是帽结构形成的关键步骤之一。
首先,加帽是指在mRNA的5-端加上m7GTP的结构。这一过程发生在细胞核内,对HnRNA进行加帽。加帽的步骤包括在磷酸酶的作用下,将5-端的磷酸基水解,随后加上鸟苷三磷酸,形成GpppN的结构,最后进行甲基化,使G进一步稳定。其次,加尾是将polyA添加到mRNA的3-端。
存在前体:真核生物的mRNA在转录后通常会形成一个前体,这个前体需要经过一系列的后加工步骤才能成为成熟的、具有生物功能的mRNA。后加工步骤:真核生物mRNA的后加工包括5端加帽、3端加尾以及内含子的剪接等步骤。这些步骤对于确保mRNA的稳定性和翻译效率至关重要。
检测加帽效率的严谨步骤鉴于全长mRNA无法直接分析,通常***用RNase H(NEB#M02***)结合生物素探针,切割后通过LC-MS检测加帽效率,具体方法请参考文献:Label-free ***ysis of mRNA capping efficiency using RNase H probes and LC-MS(DOI: 1007/s00216-016-9605-x)。
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